| 供货周期 | 现货 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,制药/生物制药,综合 |
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细胞炎症因子检测试剂盒说明书
一、检测原理
本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测样本中的细胞炎症因子水平。
向预先包被有细胞炎症因子捕获抗体的微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经恒温温育、充分洗涤后，加入TMB底物进行显色反应。TMB可在过氧化物酶的催化下转变为蓝色，最终在酸性终止液作用下转为黄色。
样本颜色深浅与其中细胞炎症因子的含量呈正相关，使用酶标仪在450nm波长下测定各孔吸光度(OD值)，结合标准曲线即可精准计算样品中炎症因子的浓度。
二、试剂盒组成
试剂盒各组分规格、配置及保存条件如下表所示，所有试剂常规保存温度为2-8℃。
| 组分名称 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存条件 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 常温 |
| 封板膜 | 2片 | 2片 | 常温 |
| 密封袋 | 1个 | 1个 | 常温 |
| 酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃ |
| 标准品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃ |
| 酶标试剂 | 5ml×1瓶 | 10ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 样品稀释液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 显色剂A液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 显色剂B液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 20×浓缩洗涤液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃ |
三、样本处理要求
为保障检测结果精准可靠，避免样本降解、污染导致结果失真，样本采集与处理需严格遵循以下要求：
及时处理：患者样本采集后需立即进行预处理，杜绝延迟处理引发的样本变质、结果偏差问题。
样本类型：可检测样本包括人体血液、血清、血浆、组织液等各类生物体液及组织样本。
低温保存：未及时检测的样本需置于低温环境储存，防止长时间放置导致样本中炎症因子降解失效。
避免反复冻融：严格杜绝样本多次冻融循环，反复冻融会破坏样本有效成分，影响检测准确性。
规范预处理：所有样本需严格按照试剂盒说明书要求完成前期处理、稀释等操作，保证样本纯度达标。
操作防护：操作人员全程佩戴手套、口罩等防护用品，严格遵守实验室操作规范，避免样本交叉污染及人身暴露风险。
四、详细操作步骤
本操作流程为通用标准步骤，不同批次试剂盒略有差异，实际操作请以配套说明书为准。
样品加样：将预处理完成的待测样品(血清、血浆、细胞培养上清等)、标准品依次加入酶标包被板微孔中。
试剂添加：按说明书配比与顺序，向各微孔加入配套酶标检测抗体等试剂，保证加样均匀、无气泡。
恒温孵育：将加样完成的孔板置于37℃恒温环境中静置孵育，使试剂与样本中炎症因子发生特异性免疫结合反应。
洗板除杂：孵育结束后，用稀释后的洗涤液充分洗涤微孔，洗去未结合的杂质、多余试剂，消除检测误差。
显色反应：依次加入显色剂A液、B液，避光静置反应，使样本充分显色。
终止反应：显色完成后，加入终止液终止反应，溶液由蓝色稳定转为黄色。
信号检测：使用酶标仪在450nm波长条件下，测定各孔吸光度(OD值)并记录数据。
数据分析：根据标准品OD值绘制标准曲线，代入样本OD值，计算出待测样本中细胞炎症因子的实际浓度及稀释校正后最终含量。
五、实验注意事项
试剂盒从2-8℃冷藏环境取出后，需室温平衡15-30分钟方可使用；酶标包被板未用完的板条，需装入密封袋密封保存。待测样本使用前需室温平衡60分钟。
20×浓缩洗涤液低温环境可能出现结晶析出，属于正常现象，可温水浴加温助溶，溶解后使用不影响实验结果。
全程加样需使用校准合格的加样器，定期校对精度，规避加样误差；单次整板加样时间控制在5分钟内，样本数量较多时建议使用排枪加样。
每次检测必须同步做标准曲线，优先设置复孔检测，提升数据准确性。若样本OD值高于标准品最高孔OD值，需用样品稀释液稀释样本后重新检测，最终结果需乘以对应总稀释倍数(×n×5)。
封板膜为一次性耗材，仅限单次实验使用，严禁重复使用，防止交叉污染。
显色底物需避光密封保存，避免光照失效，影响显色效果。
严格遵循说明书操作，所有实验结果判定均以酶标仪仪器读数为标准，禁止肉眼主观判读。
实验所用样本、洗涤液、废弃耗材均按传染性实验废弃物规范处理，做好生物安全防护。
试剂盒不同批号组分性能存在差异，严禁跨批号混用试剂，避免实验失效。
中英文说明书内容存在歧义时，以英文说明书标准为准。
